发布日期:2020-05-13 00:00
1.色谱柱 在停机前,根据您最后一次的实验条件,把色谱柱冲洗干净。请遵循如下置换原则: 反相系统:缓冲盐->水->有机溶剂 正相系统:正相溶剂->柱保存溶剂 同时,为了保证色谱柱填料不被风干损坏,取下的色谱柱两端需拧上堵头。(详见色谱柱保存篇) 2.仪器 清洗系统和手动进样阀:根据所作样品不同,关机清洗的方式不一,具体方法如下: A.如果流动相是有机相,只包括:甲醇,乙腈,异丙醇,水等;清洗时,只 需用:甲醇100%清洗40~60分钟即可关机。即将水相所对应的溶剂瓶更换为甲醇,将泵的比例调到95%冲洗。 B.如果流动相是包含了缓冲盐类,如:弱酸,弱碱(强酸碱绝对禁止注入本机!),乙酸,乙酸铵,三氟乙酸,磷酸,氨水,三乙胺,磷酸盐等。清洗时,需要用:95%水+5%甲醇清洗80~100分钟,再用甲醇100%清洗40分钟方可关机。即将放置缓冲盐的溶剂瓶换成水相,将泵的比率调到95%,清洗80~100分钟,再将水相的溶剂瓶换到甲醇,泵的比率不变,清洗40分钟方可关机。 C.色谱柱清洗的时候,不推荐用纯水洗,加入5%甲醇才能保证湿润,否则色谱柱的碳链会发生塌陷,破坏柱子。 D.进样阀的清洗原则同上,只是在laod和inject两档都要用清洗液清洗两遍。进样阀严禁停留在,Laod和inject中间。 E.清洗的最终原则是在各条管道中都保存足够多的甲醇(最好都用100%甲醇充满),以防霉变。因此在清洗的最后阶段,最好把各个输液瓶都换成甲醇再过一遍。 仪器同样应保存在有机溶剂中,具体操作步骤(以反相系统在缓冲盐状态下为例): - 取下已冲洗干净的色谱柱妥善保存,用两通连接其两端管路。 - 将含有缓冲盐的管路放入纯水流动相内,并对其进行灌注约5分钟(置换泵头及进口管内的缓冲盐)。 - 以1.0mL/min流速冲洗仪器至少30分钟(置换仪器内溶剂)。 - 将仪器所有进口管路都放入甲醇流动相中(Alliance系统包括A/B/C/D溶剂管路,洗针管路,柱塞密封清洗管路;UPLC系统通常包括溶剂管路,Purge管路,Wash管路,柱塞密封清洗管路)。 - 对以上管路还需用有机相分别执行湿灌注(每路约5分钟),进样器灌注(5次),柱塞清洗灌注以及手动洗针(各5次)。 注意:仪器上的所有溶剂管路都要按照上文提到的置换原则,最终用有机溶剂充分灌注清洗干净并保存于有机溶剂中(最好是甲醇溶剂,正相系统可保存于异丙醇中),以避免管路长菌或者堵塞。 3.关机 - 取出进样器内所有装样品的样品瓶,并妥善处理。 - 关闭所有的仪器电源并拔掉电源线,保证仪器在不带电的状态下。尤其是UPLC系统,若仪器带电,某些模块即使不开机其风扇仍在运行转动。建议拔下所有连接在墙上的插线板的插头。 - 妥善处理掉仪器废液瓶中的废液。 - 提前备份工作站中的重要数据,以防数据丢失。 |